Coenzima q reductasa de la membrana plasmática del hepatocito. Purificación, caracterización y función antioxidante

Resumen

La membrana plasmática posee un sistema redox en el que desempeñan un importante papel las ubiquinonas, estrechamente relacionadas con las funciones antioxidantes. En el trabajo se ha comprobado que estas ubiquinonas intervienen en el transporte transmembrana de la membrana plasmática, donde debe existir un componente enzimático encargado de reducir a dichas ubiquinonas, ya que su forma predominante es el estado reducido. Así abordamos la purificación de dicho componente enzimático, obteniendo una proteína de 34 kDa, que resultó ser una citocromo b5 reductasa. Esta enzima se caracterizó bioquímicamente, y se obtuvieron anticuerpos policlonales contra ella. La enzima (p34) resultó ser capaz de reducir al CoQ en un sistema reconstituido de liposomas, a partir del NADH. De esta forma aparece como responsable de mantener la capacidad antioxidante en el interior de la membrana. Para comprobar si realmente ejerce dicho papel "in vivo" decidimos emplear sistemas carentes de antioxidantes exógenos que pudiesen enmascarar el verdadero efecto de la p34. Estos sistemas consistieron en eliminar la vitamina E y el selenio de la dieta de un grupo de ratas, al que se comparó posteriormente con otro grupo control (alimentado con vitamina E y selenio). Así comprobamos que en las membranas plasmáticas de las ratas deficitarias en vit. E y si se producia un incremento muy importante en los niveles de CoQ, como respuesta adaptativa ante el sometimiento del estrés oxidativo inducido por la falta de vitamina E y Se. Mediante el uso de anticuerpos antes citados se comprobó que también se incrementaban los niveles de la citocromo b5 reductasa en estas membranas deficitaris. Ambos hechos contribuyeron a aportar una protección antioxidante a las membranas deficitarias, mediada por el NADH y el NADPH. Sin embargo la p34 no puede usar al NADPH como aceptor del sistema, luego deducimos que otra enzima debiera estar implicada en la reducción del