Propiedades fisicoquímicas e inmunoquímicas de la ferredoxina-glutamato sintasa y nitrito reductasa del alga eucariótica "Monoraphidium braunii"

Abstract

El alga eucariótica Monoraphidium braunii muestra actividad glutamato sintasa (GOGAT) con especificidad por ferredoxina (Fd) reducida o por NADH. La actividad NADH-GOGAT incrementa 5,6 veces su nivel de actividad en carencia de fuente nitrogenada. ... 150%; font-family: 'Times New Roman','serif'; font-size: 12pt"> La Fd-GOGAT, monomérica (157 kDa) y localizada en el pirenóide del cloroplasto de este alga, posee máximos de absorción a 280, 375 y 435 NM, indicativos de la presencia de flavinas y una agrupación sulfoférrica, en su molécula. La enzima puede reducirse con un sistema fotoquímico formado por luz, EDTA y 5-DEAZARRIBOFLAVINa. Por su parte, la nitrito reductasa (NIR), también monomérica (63 kDa), muestra máximos de absorción a 280, 385, 573 y 690 NM, indicativos de un Sirohemo y una agrupación sulfoférrica en su molécula. Estudios inmunoquímicos, demuestran la existencia de un dominio común de interacción con Fd, en la Fd-GOGAT y la NIR, e indican la existencia de analogías entre las Fd-GOGATS de algas, cianobacterias y plantas superiores. Complejos covalentes, entre GOGAT y Fd o Flavodoxina (Fld) permiten concluir que la gogat posee dos sitios de interacción con Fd o Fld. La enzima, además, utiliza residuos de lisina y arginina en su interacción con los grupos carboxilos de la Fd o la Fld. Nuestro grupo de trabajo lleva tiempo estudiando la ruta de asimilación de nitrato en algas eucarióticas, y un aspecto ciertamente apasionante son las enzimas dependientes de ferredoxina, como son la nitrato reductasa y la glutamato sintasa. De ahí que el trabajo desarrollado en esta Tesis se haya centrado precisamente en los siguientes puntos:a) Estudio de la actividad glutamato sintasa en extractos crudos de Monoraphidium braunii.b) Purificación y caracterización de la glutamato sintasa dependiente de ferredoxina, así como la nitrato reductasa de Monoraphidium braunii.c) Localización intracelular de la Fd-glutamato sintasa de Monoraphidium braunii, y estudio inmunoquímicos de reacción cruzada con la enzima de otros organismos, así como con la NiR de Monoraphidium braunii.d) Estudio de la interacción entre la glutamato sintasa de Monoraphidium braunii y la ferredoxina de esta alga, o la flavodoxina de Anabaena, haciendo uso de las técnicas de formación de complejos covalentes y reactivos específicos de grupos funcionales.