Establecimiento de metodologías analíticas para la separación y caracterización de péptidos y proteínas de interés terapéutico

Resumen

El objetivo final de esta tesis doctoral ha sido el establecimiento de metodologías analíticas para la separación y caracterización de mezclas complejas de péptidos y proteínas de gran interés terapéutico, empleando para ello la Cromatografía de Líquidos (LC) y la Electroforesis Capilar (CE) con detección por Espectrofotometría Ultravioleta (UV) y sus acomplamientos ala Espectrometría de Masas (MS). Este objetivo principal engloba otros más concretos que se detallan a continuación: * Desarrollar modelos que describan el comportamiento cromatográfico y electroforético de sustancias peptídicas presentes en mezclas complejas, con la finalidad de poder predecir, a partir de un reducido número de medidas experimentales, las condiciones para obtener una separación óptima de estos analitos. Se establecen dos tipos de modelos: - Modelos que explican el comportamiento cromatográfico de los analitos en función de la polaridad de la fase móvil. - Modelos que explican el comportamiento cromatográfico y electroforético de los analitos ionizables en función del pH de la fase móvil cromatográfica o del electrolito utilizado para la serpación electroforética, las constantes de disociación de los analitos estudiados y los coeficientes de actividad. * Determinar mediante los modelos anteriores los valores de pKa, en medio acuoso o hidroorgánico, de las sustancias analizadas. * Utilizar la Cromatografía de Líquidos acoplada a la Espectrometría de Masas con Ionización por Electrospray (LC-ESI-MS) para la separación y caracterización de las sustancias presentes en crudos de síntesis de hormonas peptídicas de gran interés terapéutico. Proponer las condiciones de separación óptímas para una posterior purificación por LC a escala preparativa de la hormona peptídica sintetizada y para identificar las impurezas presentes en las mezclas. * Combinar la LC, la LC-ESI-MS y la CE para profundizar en el análisi