Propiedades fisicoquímicas e inmunoquímicas de la ferredoxina-glutamato sintasa y nitrito reductasa del alga eucariótica "Monoraphidium braunii"

  1. Vigara Fernández, Javier
Supervised by:
  1. José María Vega Piqueres Director

Defence university: Universidad de Sevilla

Year of defence: 1995

Committee:
  1. Carlos Gómez-Moreno Calera Chair
  2. Carlos Vílchez Lobato Secretary
  3. Miguel Ángel de la Rosa Acosta Committee member
  4. José María Maldonado Ruiz Committee member
  5. Francisco Miguel Cánovas Ramos Committee member

Type: Thesis

Teseo: 49114 DIALNET lock_openIdus editor

Abstract

El alga eucariótica Monoraphidium braunii muestra actividad glutamato sintasa (GOGAT) con especificidad por ferredoxina (Fd) reducida o por NADH. La actividad NADH-GOGAT incrementa 5,6 veces su nivel de actividad en carencia de fuente nitrogenada. ... 150%; font-family: 'Times New Roman','serif'; font-size: 12pt"> La Fd-GOGAT, monomérica (157 kDa) y localizada en el pirenóide del cloroplasto de este alga, posee máximos de absorción a 280, 375 y 435 NM, indicativos de la presencia de flavinas y una agrupación sulfoférrica, en su molécula. La enzima puede reducirse con un sistema fotoquímico formado por luz, EDTA y 5-DEAZARRIBOFLAVINa. Por su parte, la nitrito reductasa (NIR), también monomérica (63 kDa), muestra máximos de absorción a 280, 385, 573 y 690 NM, indicativos de un Sirohemo y una agrupación sulfoférrica en su molécula. Estudios inmunoquímicos, demuestran la existencia de un dominio común de interacción con Fd, en la Fd-GOGAT y la NIR, e indican la existencia de analogías entre las Fd-GOGATS de algas, cianobacterias y plantas superiores. Complejos covalentes, entre GOGAT y Fd o Flavodoxina (Fld) permiten concluir que la gogat posee dos sitios de interacción con Fd o Fld. La enzima, además, utiliza residuos de lisina y arginina en su interacción con los grupos carboxilos de la Fd o la Fld. Nuestro grupo de trabajo lleva tiempo estudiando la ruta de asimilación de nitrato en algas eucarióticas, y un aspecto ciertamente apasionante son las enzimas dependientes de ferredoxina, como son la nitrato reductasa y la glutamato sintasa. De ahí que el trabajo desarrollado en esta Tesis se haya centrado precisamente en los siguientes puntos:a) Estudio de la actividad glutamato sintasa en extractos crudos de Monoraphidium braunii.b) Purificación y caracterización de la glutamato sintasa dependiente de ferredoxina, así como la nitrato reductasa de Monoraphidium braunii.c) Localización intracelular de la Fd-glutamato sintasa de Monoraphidium braunii, y estudio inmunoquímicos de reacción cruzada con la enzima de otros organismos, así como con la NiR de Monoraphidium braunii.d) Estudio de la interacción entre la glutamato sintasa de Monoraphidium braunii y la ferredoxina de esta alga, o la flavodoxina de Anabaena, haciendo uso de las técnicas de formación de complejos covalentes y reactivos específicos de grupos funcionales.